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除少數(shù)培養(yǎng)基只需加熱溶解,不需高壓滅菌外,大部分培養(yǎng)基均需121℃高壓滅菌15-30分鐘。尤其是對無菌試驗培養(yǎng)基滅菌不徹底,直接關(guān)系到試驗結(jié)果。因此必須認(rèn)真對高壓滅菌器進(jìn)行滅菌效果的驗證。?
1.試驗材料
(1)嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片。嗜熱脂肪芽胞桿菌是本法常用的生物指示菌,含芽胞量5-lO5 CFU/片。
(2)121℃壓力蒸氣滅菌化學(xué)指示卡。
(3)溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基116℃高壓滅菌20分鐘后備用。
(4)O-150℃留點溫度計。
2.方法與結(jié)果
將嗜熱脂肪芽胞桿菌紙片(以下簡稱菌片)用無菌鑷子放人密封試管中?;瘜W(xué)指示卡和留點溫度計放入敞口試管中。以上兩種試管各準(zhǔn)備5-10份。分別放置在高壓滅菌器蒸氣口處、底部排氣口處及底部出水口處或上下左右中間5處。如滅菌器為二層,則需放10處。
留點溫度計標(biāo)化合格后方可用于驗證試驗。檢測前,需將溫度計的水銀柱甩至40℃以下。每次監(jiān)測后留點溫度計的溫差應(yīng)存1℃之間,則說明滅菌器內(nèi)的溫度分布是均勻的。溫度驗證儀
滅菌后的菌片應(yīng)在嚴(yán)格無菌操作條件下放入滅菌后的溴甲酚紫胨水培養(yǎng)基內(nèi)56-60℃培養(yǎng)24-48小時,觀察顏色變化。如培養(yǎng)基變?yōu)辄S色,說明菌片中的嗜熱脂肪芽胞桿菌尚未完全滅活,細(xì)菌仍可在培養(yǎng)基中生長,分解葡萄糖產(chǎn)酸變?yōu)辄S色。如培養(yǎng)基顏色不變化仍為紫色,則說明芽胞已滅活。同時要用未經(jīng)滅菌的紙片放入培養(yǎng)基內(nèi)作為陽性對照,不加紙片的空白培養(yǎng)基作為陰性對照。
化學(xué)指示卡上的指示色塊,在高壓蒸氣滅菌時,由淡黃色變?yōu)楹谏?。隨著顏色變化的深淺,并與對照色相比,可判斷滅菌效果是否達(dá)到要求?;瘜W(xué)指示卡應(yīng)在干燥處保存。遇潮會變色,影響滅菌效果的觀測。
高壓蒸氣滅菌必須使蒸氣順利進(jìn)入滅菌器內(nèi),與滅菌物品接觸,并將原有的冷空氣排出方可達(dá)到滅菌的效果。要進(jìn)行空載熱分布和滿載熱穿透力驗證(滿載時不超過總體積的2/3)。二種驗證各重復(fù)三次,共做六次。溫度驗證系統(tǒng)
5個點六次試驗表明溫度均在121℃,化學(xué)指示卡變黑;程度與對照色一致;培養(yǎng)基均未改變顏色,說明高壓蒸氣滅菌效果合格。
高壓滅菌器屬于強檢儀器,但強檢只是對儀器物理參數(shù)的考核。所以做過強檢的滅菌器還必須進(jìn)行滅菌效果的驗證。一些單位常常忽略了這個重要的問題。國內(nèi)市售的手提滅菌器,往往儀器指針達(dá)到所需的溫度,但滅菌物品的實際溫度卻未達(dá)到要求。導(dǎo)致滅菌物品不徹底,影響實驗結(jié)果。培養(yǎng)基滅菌不徹底,影響培養(yǎng)基的使用及結(jié)果判斷。因此高壓蒸氣滅菌器無菌效果的驗證是一個必須引起重視的問題。